CGT病毒载体细胞培养与纯化解决方案

基因医疗临床试验载体使用情况

截止2023年1月，与此相关的全球上市细胞与基因治疗产品共计26项，慢病毒载体8项，腺相关病毒6项，腺病毒6项，逆转录病毒3项，单纯疱疹病毒2项，埃可病毒1项。临床项目中，以AAV为载体的基因治疗试验数量呈现迅猛增长之势，在 ClinicalTrials.gov登记的以AAV为载体的基因治疗临床试验从2016年的不足10个增至2018年11月的145个，再到2022年6月进一步提升至 239个。

病毒载体生产工艺

病毒载体生产需要稳健的工艺流程，且工艺可进行全面放大并符合法规要求。

上游工艺是得到数量充足，包装完整病毒颗粒的过程，常见细胞主要有3种：基于人胚胎肾细胞HEK293的三质粒转染系统；基于夜蛾昆虫细胞(Sf9)的杆状病毒表达载体系统；哺乳动物稳定细胞系等。细胞复苏和DMSO去除后进入细胞培养阶段，通过控制pH，DO，培养温度等参数在培养基体系内得到适宜密度的细胞。在质粒转染阶段，控制质粒总量，转染试剂/质粒质量比，细胞密度等相关工艺参数，在完成病毒包装后进行收获。

下游工艺是去除杂质和病毒载体浓缩，由于每种载体产品的特性不同，例如空壳/完整衣壳比例，滴度，吸附特性，聚集特性等，不可能开发一种通用工艺。典型步骤：细胞收获液裂解后经澄清去除细胞碎片和颗粒物类杂质，需要考虑过滤器孔径，载量，流速的参数，核酸酶消化进行酶切反应以去除宿主DNA或转染残留的质粒DNA，由于上游收获的体积较大，通过超滤浓缩减少工作体积，并且要防止产物聚集；病毒载体在层析阶段可能用到离子交换层析，亲和层析或凝胶层析，需要充分考虑目标产品的特性进行工艺选择；最后超滤再进行浓缩换液，除菌过滤和灌装。

金仪盛世病毒载体工艺路线

CUR一次性激流式生物反应器

采用“非鼓泡式交界面传氧机制”进行传氧，无搅拌桨、无底通鼓泡极大减少剪切力对细胞的损伤，特别适合剪切力敏感的细胞，用于病毒载体培养以实现高密度高活性细胞培养，适用于不同培养工艺（如批次培养、批流加、灌流）。

▪ 无搅拌桨，剪切力极低平均剪切率低于20S^-1

▪ 无需消泡剂，减少细胞抑制

▪ 控制系统智能化，操作界面简单，数据实时采集

▪ 可实现参数和工艺的远程监控；为用户提供符合FDA 21CFR part 11 电子记录和电子签名的多级账户管理系统

CUR在病毒载体培养的数据表现

293细胞在CUR2.5L反应器中最大细胞密度为8.2*10⁶ cells/mL

SF9细胞在CUR50L反应器中最大细胞密度约为1.1*10⁷cells/mL

ITD一次性磁力搅拌系统

ITD 一次性磁力搅拌系统采用新进的混合技术，用于生物制药工艺上游、下游、制剂灌装等环节缓冲液和培养基制备、中间产品混合、最终制剂。ITD 搅拌系统降低交叉污染风险，减少清洗灭菌工艺及验证步骤，操作处理灵活高效。

▪ 底部采用磁力耦合搅拌设计

▪ 可开关门设计，无清洁死角

▪ 配置电极安装支架

▪ 模块化系统，可根据客户需求选择搭配

▪ 完善的数据完整性及预留中控系统如DCS、SCADA的通讯接口

▪ 可配置夹套与隔热保温层，具有良好的热交换性能，可对配液袋里的液体进行高效率的加热和冷却

▪ 可实现在线数据管理、温控、称重、pH 控制、电导率检测监控

▪ 混合仓底部 1°倾斜设计，减少料液残留

▪ 50-2500L全体积覆盖

AutoPrep生产级别层析系统

生产级层析系统适用于病毒载体等生物制药纯化工艺的中试及大规模生产，作为一套完整的集成控制单元，它可自动实现层析柱的平衡、上样、洗脱、收集、再生、清洗等纯化分离过程中的工艺要求，符合现行GMP的法律法规。系统可提供多种灵活配置，以适应大规模生产需要。

▪ 结构紧凑，堆叠式管路，最小死体积

▪ 符合FDA 21CFR Part 11规范，数据、日志实时记录，可追溯，不可修改

▪ 灵活强大的方法编辑功能，可基于时间、体积、柱体积进行自动流程生产

▪ 符合USP Class VI的材质，提供完整的验证文件